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, u7 E& K5 m6 n, I1 {+ l% Y. y 中图分类号：X703 文献标识码：A 文章编号：1009－2455（200）06－0032－03- w ]' P0 N0 i% i" v" q
An Experimental Study on Microbiological Treatment of Lubricating Oil-Contaminated WaterLlU Qin-ya, ZHOU Hai-dong(College of Environmental and Spatial Informatics, China University of Mining and Technology, X......
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中图分类号：X703 文献标识码：A 文章编号：1009－2455（200）06－0032－03
, U5 H& N3 s7 _An Experimental Study on Microbiological Treatment of Lubricating Oil-Contaminated WaterLlU Qin-ya, ZHOU Hai-dong(College of Environmental and Spatial Informatics, China University of Mining and Technology, Xuzhou 221008, China)
1 t& ]! ?; V( D1 N4 }7 c Abstract: Two strains of high-effective, lubricating oil degrading bacteria, ZL1 and ZL2, were screened out from oil-contaminated soil, which were preliminarily identified as flavobacteriun and tnicrococcus. The effects of temperature, oil content and pH value on their oil-degrading capacities were dletermined by orthogonal experiment of growth conditions. A degrading capacity experiment was carried out with an initial wastewater oil content of 270 mg/L. The experimental results showed that the oil removal rates by the strains ZL1 and ZL2 from the in-oculum in about 2 days were up to 67. 9% and 76. 2% respectively and the adaptation range of strain ZL2 to oil content and pH value was wider than that of ZL1. Key Words: lubricating oil; oil-containing wastewater; wastewater treatment; microorganism; flavobacteri-un; micrococcus ' f$ M' o! m0 E
近年来，国内外对石油及兵产品的微生物降解研究常见报道，却鲜见机油废水微生物降解方面的研究。本试验目的是通过常规微生物驯化方法，以市售机油为唯一碳源，从油污土壤中分离筛选出机油高效降解菌株，并对其生长条件及降解特性进行研究，以期进一步应用于含油污水的治理。 - _% |" J& r* j/ r0 h C: R
1 材料与方法 , X/ l% b1 h9 w- z' p. S3 y, @$ Q
1．1 土壤样品 某石油库贮油罐附近的石油污染土壤，取样3份，按含油量由多至少编为1＃，2＃，3＃。1．2 培养基 本试验选取两种无机基础培养基，（用蒸馏水配制并高压蒸气灭菌），编号分别为1＃，2＃，组成如下： 1＃基础培养基：p（KH2PO4）＝0.5g／L，ρ（K2HPO4）＝0.5g／L，P（MgSO4·7H2O）=0.2g／L，ρ（NaCl）=0.2g／L，p（CaCl2）＝0.1g／L，ρ（NH4NO3）＝1.0g／L，MnSO4痕量，FeCl3痕量。 2＃基础培养基：p（NaNO3）=2.0g／L，ρ（KH2O4）＝0．2g／L，ρ（MgSO4.7H2O）＝0.2g／L，ρ（酵母浸膏）＝1.0g／L． 含油培养基是向上述无机基础培养基中加入适量机油。固体培养基中加入质量分数为0．2％的琼脂。1．3 优势菌筛分试验1．3．1 选择富集培养 称取土样各10g，加入到500mL1＃含油培养基（含机油4mL）中，调pH值7.0，通气恒温30℃培养48h后，分别移取上述培养液5mL于45mL1＃，2＃含油培养基（含机油2mL）中，恒温30℃振荡培养。1.3.2 平板分离 制作1＃，2＃固体含油培养基平板苦干，用接种环蘸取振荡培养较好的菌液在相应平板划线，恒温30℃培养48h后平板划线分离，重复数次。选择生长状况良好的菌株进行平板扩大培养。1．4 生长条件正交试验 在保证供氧和氮、磷营养前提下，选择温度。油的质量浓度（以mg／L计）和pH值作为本次实验的三个因素进行三水平实验，方案见表1、表2。将平板培养48h的菌体刮下，5000r／min离心5min，分离得到湿菌体。向方案中每个样品加入0.5g湿菌体，培养60h后测定样品中油的质量浓度。
0 L+ d. i [8 a表1 ZL1菌株正交试验方案及试验结果 ) l M4 I( |- V% X7 O) Q
. K# o: P: G" q6 G" S
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( |' c+ x1 v u" n) g! x分组号
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测定结果ρ（油）/（mg.L-1)
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6 w- N$ N( i6 l2 B4 d$ |128
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14
' y4 {8 Q ?4 B) [1 o
; R. N% ]2 C7 M1 } # @1 K" u( `/ m/ e/ x% a
表2 ZL2菌株正交试验方案及试验结果
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$ P ]( l. g1 b7 c4 I7 R6 t
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分组号" K5 }! _5 A3 |" x0 L$ [
因素
1 m( z: m% ~" R测定结果ρ（油）/（mg.L-1)9 G i& u+ Y v' x1 e. S0 p2 A
降解测量ρ（油）/（mg.L-1)
9 P! b) G2 M* f2 k' Q! a- C/ q
^0 }& h7 Q5 v& N$ M0 s- P2 X温度/ P! V q Y- t0 x, M+ l% ^" ~
ρ（油）/（mg.L-1)
. f. h! K8 r# F* c( M+ E7 v0 lpH值
5 q9 k. H5 h) Q
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25& t2 ]' ?7 n V) R4 J
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226& n& q9 w0 O1 w* E/ h; |2 W
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X z) d$ I7 N w264
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" S& z" D. F8 o: M1.5 降解能力试验 配制机油质量浓度为270mg／L的含油培养基1L，投入小型间歇反应器中，加入离心分离得到的湿菌体5g，通气恒温30℃培养，间隔12h取样测定其含油量。1．6 测试方法 用紫外介光光度法测定。 & E+ d* ~& T6 o9 S$ e
2 结果分析
# e2 z3 m( S3 \2．1 优势菌筛分试验 富集培养过程中，1＃土样的培养液出现的泡沫较多，乳化现象明显，菌液也较为粘稠，分离出较多的菌株，说明土壤中的石油烃能刺激石油降解菌的生长。经过选择富集培养、平板分离出4株以机油为唯一碳源的菌株，编号为ZL1，ZL2，ZL3，ZL4，性状见表3。进一步培养后筛选出降解性能较好的ZL1（1＃培养基）和ZL2（2＃培养基）进行正交试验和连续培养试验。
+ o/ H# W7 ]5 G表3 4株机油降解菌形态特征
; U; Y; n/ n- `5 E, M% I* g4 c. o' B$ A
- L- u( ~. d9 d
" @( B5 I! f" s) C. N7 u ~- q5 W, O7 Z1 d# f/ W) z
形态特征
1 E/ \! ]4 ]& y. T( |ZL1' F8 y' }% M" g
ZL2: v- k9 L- f7 P, B& Y2 G
ZL3
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/ O! z- ]$ `% Z9 r: V
% N$ g; t9 V4 T: ?" z) l7 v6 _菌落颜色
/ H/ Y5 {/ L' }' U粉红- o1 L# R- Y! k0 e
淡黄
, A3 J0 C& R1 j- L& H9 _' {: T3 F" {淡黄
`4 P/ n7 C) K, I0 y; ^粉红; P6 r% x* k( {% Q% P# j) I
& h1 Z( D N" r2 I' y( I
菌落形态4 h z4 u. s$ j2 E0 A: D
不透明，微隆起，全缘，
3 b; Y7 G; Z; [! F" { q( X半透明，圆形5 Q) v- _/ P* g3 G; s
半透明，圆形，隆起，
* e% t" l5 r3 r G" \0 c0 b$ ^不透明，米粒状突起，* D9 y) ]2 s; D3 u- ^" j9 s; g
' Y+ I# t6 ~1 z5 J- T1 W1 D0 I4 t v4 h0 t0 n
8 Q# m) W) w$ [: K! P光滑，有光泽* \& @% {1 o1 H, d7 _
光滑，较干燥6 f% |( h; _% b/ t8 k
光滑，有光泽5 ~* O8 E+ x8 t7 J
较湿润
4 b1 F4 g S6 N7 j
& o# K9 x7 {6 ?7 j; }+ E# {* h9 P菌体形态
) a3 ]/ o0 g3 f; _8 s短杆
5 q' ~1 f& f& g/ l球形
# R9 o9 j: L: X) {( T( u7 V, L杆状' T. r8 u4 J* a0 Y) Z; V; U
丝状$ h, u& B; \5 b1 [6 m
" J# P9 ^! s; b8 X% h7 Z$ s6 v
菌体大小/μm
0 ^/ o1 Z4 U8 r% k/ F/ H3 L: l（0.3-0.8)×(0.6-1.0）
/ R. X+ O0 K3 ^% }; f/ AΦ0.3
: ^) \3 N' c0 _* e' X（0.5-0.8)×(1.3-5.0)/ |9 m3 M, |4 h5 U! j
0.2×(6-60). Y6 U* G" K8 D& ]* ~' p
; i% p: W5 h% u% @' B
革兰氏染色
6 M$ j* s9 Q& Q2 T+ K/ ^G9 g& p% ]4 o! m, y1 I9 {
G
2 ~1 P7 i, D/ D1 q- P( w* }+ zG3 N% s! ~. |6 M' |0 c
G7 j- ~; Q$ v: A% P8 o7 g$ w
) ^# |+ y. c/ w9 p初步鉴定
, J2 x! `! y9 Q5 ]黄杆菌属
5 W, z; ~. {1 y5 ]& R: {1 t微球菌属
b S1 X2 v& D8 X假单胞菌属
- K: a" w4 Q7 _酵母菌属, I' ~) h4 c1 E, j4 i
2．2 生长条件正交试验 ZL1，ZL2菌株按设定的正交试验方案进行试验，测定其剩余含油量，以降解油量作为考察指标，计算结果见表2、表3。分析极差值R可以看出：ZL1菌的R温度为128，ZL2菌的R温度为73，均为最大极差值，说明温度是影响降解效果的主要因素。25℃ZL1菌降解机油能力较强；油质量浓度越低降解效果越好；pH值为7时，降解效果最好，说明ZL1菌适于在中性条件下生长。30℃ZL2菌降解机油能力较强；机油的质量浓度在368-767mg／L范围内对降解效果影响不大，以ρ（油）=574mg／L时降解效果最明显，还应进一步扩大试验的油含量范围以确定油含量对ZL2菌降解能力的影响；pH值在4－8范围内对降解效果的影响也不显著，其中PH值为6时降解效果最好，说明ZL2菌较适于在中性偏酸条件下生长。2.3 降解能力试验 向1L油质量浓度为270mg／L培养液中投加5g湿菌体进行间歇培养，考察ZLI，ZLZ菌的降解能力，结果见图1。由含油量与培养时间关系曲线可以看出：ZL1，ZL2菌被加人含油培养基后很快适应环境，随着培养时间的增长，含油量不断下降。ZL1菌在30h左右去除率达到最大，后含油量下降缓慢，到60h左右曲线趋于平直；ZL2菌在20h左右去除率达最大，48h左右曲线趋于平直。曲线说明ZL1，ZL2菌适应能力较强，ZL1菌在0－60h内生长旺盛对机油的去除率可达67．9％，ZL2菌在0－48h内生长旺盛，对机油的去除率高达76.2％，试验后期降解曲线趋于平直，含油量基本不再变化，可能是由于机油中的一些重组分难于降解的原因。
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- @0 H+ S+ `5 u9 j* b3 结论
( N* h7 F! u( p0 W6 C' q: { ①石油污染土壤较适于做高效石油降解菌驯化菌源。筛选到两株高效机油降解菌ZL1，ZL2。通过正交试验得出ZL1黄杆菌属适于在25℃，油的质量浓度在424mg／L左右，中性条件下生长。ZL2微球菌属适于在 30℃，油的质量浓度在574mg/L左右，中性偏酸条件下生长。 ②温度对ZL1，ZL2菌的机油降解能力影响较大。ZL2菌的PH值、机油浓度适应范围较广，有较好的应用前景。 ③ZL1，ZL2菌对初始机油质量浓度为270mg／L培养液的去除率分别达到67.9％和76.2％，混合菌株的降解效果有待进一步研究。 + _9 k) }5 s9 K( j9 M
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作者简介：刘勤亚（1977－），女，河北石家庄人，环境工程专业硕士在读。1 X0 l) @5 g2 d; k: F- X2 a
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狗仔卡
发表于 2010-2-21 20:12
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